导读 DMD 是一种严重的肌肉退化性疾病，由导致肌营养不良蛋白基因移码的基因组突变引起。外显子跳跃是一种很有前途的恢复肌营养不良蛋白的方法...
DMD 是一种严重的肌肉退化性疾病，由导致肌营养不良蛋白基因移码的基因组突变引起。外显子跳跃是一种很有前途的恢复肌营养不良蛋白的方法，而 CRISPR-Cas9 系统则作为一种新兴方法出现。
然而，诱导大缺失以覆盖分布在数百个碱基上的目标外显子的技术有限。
关于该研究
本研究评估了 CRISPR-Cas3 系统作为 DMD 患者的基因组编辑工具。
针对 Cas3 开发了基于双色单链退火 (SSA) 的报告系统，以增强基因编辑的细胞，然后进行距离分析。
Cas3-CRISPR RNA (crRNA) 的多重作用导致了基因组 MES。研究了在 DMD 诱导的多能干细胞中诱导 MES 的最佳 crRNA 配对，并设计了一种富集基因组编辑细胞的报告方法。
为了研究脱靶诱变的可能性，对基因编辑的克隆进行了全基因组测序 (WGS)，然后研究了与潜在 CRISPR RNA 结合区域相关的缺失。
一对向内夹着目标基因组区域的 crRNA 用于分析。使用适用于双 Cas3 的 SSA 报告载体系统丰富了双 Cas3 方法。
研究小组还在人胚肾 (HEK)293T 细胞中测试了间隔为 344 kb 的内向双 Cas3 诱导的缺失模式。插入包含 CRISPR RNA 检测区域的长间隔区(0.5 至 1.7 kb)的序列，以将目标基因序列延伸至 Cas3 缺失。
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