F低细胞计数是一种广泛使用的分析技术，可根据所选标记的存在或不存在来区分细胞群。然而，流式细胞术面板中可包含的标记物数量受到具有可区分发射光谱的荧光团数量的限制。光谱流式细胞术是传统流式细胞术的进化版本，通过区分相似发射的荧光团来克服这个问题，从而增加面板尺寸。
Kaitlyn Sadtler是 Earl Stadtman 研究员、国家生物医学成像和生物工程研究所 (NIBIB) 免疫工程科主任，研究组织创伤和医疗设备植入的免疫反应。在最近发表的《细胞组织器官》论文中，萨特勒的实验室开发了一种 24 色光谱流式细胞仪面板，用于研究大鼠肌肉损伤部位的免疫细胞浸润。1
什么是流式细胞术和光谱流式细胞术?
流式细胞术在细胞流过机器时一次测量一个细胞上不同蛋白质的表达。你可以把它想象成穿过花园软管的弹珠。当每个弹珠通过时，探测器会说“这个弹珠里面有橙色”或“这个弹珠里面有紫色”。这些不同的颜色代表荧光团的峰值发射，这告诉我们细胞上存在哪些蛋白质。
生活和科学中的一切都是混乱的。一些荧光团发射多种波长，因此一些大理石内部具有红橙色，而不仅仅是橙色或红色。光谱流式细胞术是流式细胞术的一种，它不是查看特定通道(即橙色通道或红色通道)中的峰值，而是查看整个光谱的模式。这项技术使研究人员能够从颜色非常相似的荧光团中区分出信号。
您为什么要为大鼠生成光谱流式细胞仪面板?
我们从事免疫学和生物工程的交叉领域，每个领域都有不同的模型系统。长期以来，小鼠一直是免疫学的主力，因此试剂数量绝对过多。然而，研究人员在评估医疗设备和生物材料时更频繁地使用大鼠，但试剂的可用性有限。我们希望弥合小鼠模型中进行的基础机械免疫学研究与大鼠模型中进行的生物材料研究之间的差距。我们的目标是弄清楚老鼠有哪些工具，将它们组装成一个可用的工具箱，并展示该工具箱。光谱流式细胞仪使我们能够使用类似颜色的荧光团，而这些荧光团不一定可以在标准流式细胞仪上一起使用。
您是如何构建光谱流式细胞术面板的?
为了构建我们的小组，该论文的主要作者 Kenneth Adusei 和我对现有的各种大鼠抗体进行了产品搜索。我们创建了一个试剂电子表格，其中说明了哪些供应商拥有哪些抗体以及哪些颜色。至于选择使用哪种荧光团，我们需要评估样品的自发荧光，以避免出现自发荧光的峰值通道。
光谱流式细胞仪的优点和缺点是什么?
光谱流式细胞术使科学家能够区分荧光团的真实信号与重叠荧光团可能渗出的信号。这让研究人员可以自信地一次测量更多颜色。他们获得了更多想要的信息，但也获得了自发荧光的噪音。我们使用高度自发荧光的样本，其中一些自发荧光来自骨髓细胞本身，在我们对它们进行染色之前，它们会发出明亮的漂亮颜色。这给了我们一个额外的变量来处理。但自发荧光也提供了大量信息。例如，我们可以仅通过嗜酸性粒细胞的自发荧光来识别嗜酸性粒细胞，无需任何标记。这表明未来可以根据自身荧光来识别不同的细胞群。尽管额外的噪音令人痛苦，但噪音中蕴藏着信息。我们只需要阅读信号即可。
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