快速上手mRNA-LNP等脂质纳米颗粒包裹核酸,超全超详细的入门级实验指南! 人流后几天能洗头用吹风机(人流后几天能洗头) 人流后第一次来月经量特别多怎么回事还疼(人流后第一次来月经量特别多怎么回事) 无痛人流后可以吃什么水果?(无痛人流后可以吃什么水果) 白细胞多高才是白血病(白细胞过高会得什么病) 坐月子感冒了怎么办?(坐月子感冒了怎么办) 癣的病因(癣是怎样引起的) 大人湿疹用什么药膏比较好(大人湿疹用什么药膏) 胆囊息肉能自己消失吗严重吗(胆囊息肉能自己消失吗) 男性梅毒症状是什么样 最早(男性梅毒症状是什么) 小孩发烧38度5怎么处理方法(孩子发烧38度5严重吗) 动脉血氧分压与静脉血氧分压(静脉血氧分压和动脉血氧分压的区别) 大便有白色的小虫子对人体有害吗(大便白色蠕动的小虫子是怎么回事) 左乳低回声结节bi-rads3类严重吗(左乳低回声结节3类什么意思) 乳腺癌早期三处疼痛(乳腺纤维瘤疼吗) 每个人肚子里都有蛔虫吗图片(每个人肚子里都有蛔虫吗) 咽喉癌的早期症状表现如何检测(咽喉癌的早期症状) 乳腺纤维瘤一定要割吗(乳腺纤维瘤必须切除吗) 乳腺纤维瘤严重吗?(乳腺纤维瘤严重吗) 乳腺有结节可以按摩吗?(乳腺有结节可以按摩吗) 什么是乳腺癌的橘皮样改变(乳癌橘皮样改变的表现) 乳腺纤维瘤疼吗怎么治疗(乳腺纤维瘤疼吗) 一般宝宝多大会说话(宝宝多大会说话) 心电图心率多少是正常的(心电图心率多少是正常) 黄疸什么原因导致的(小孩黄疸是什么原因引起的) 肾阳虚可吃六味地黄丸吗(肾阳虚能吃六味地黄丸么) 孕期hcg正常值是多少范围(孕期HCG正常值是多少) 接吻感染乙肝的几率大吗(接吻感染乙肝的几率) 药流后三个月吃避孕药对身体有什么伤害(吃避孕药对身体有什么伤害) 没睡着但是打呼噜(没睡着也打呼噜是什么原因) 小孩发高烧40度手脚冰凉(小孩发烧40度手脚冰凉怎么办) 小孩半夜烧的厉害怎么办(小孩半夜烧到40℃怎么办) 精子在体内存活几天(精子在人体内存活几天) 蒲公英茶根功效和作用(蒲公英茶根功效与作用) 受精卵着床出血是啥颜色(受精卵着床出血颜色是什么) 六个月宝宝缺铁吃什么食物补充最快(6个月婴儿缺铁怎么补) 吃了布洛芬缓释胶囊可以喝酒吗(吃了布洛芬可以喝酒吗) 肝脏纤维化到肝硬化需要多长时间?(肝纤维化到硬化要多久) 中午吃过消炎药晚上可以喝酒吗(中午吃了消炎药晚上能喝酒吗) 感冒了能吃鱼吗?(感冒了能吃鱼吗) 感冒吃鸡蛋吗咳嗽可以吃吗小孩(感冒吃鸡蛋可以吗) 感冒最快的恢复方法(感冒了怎样好的快) 引产手术的过程具体是怎样的(引产术过程) 老人心跳慢有危险吗?(老人心跳慢有危险吗) 新生儿感冒症状有哪些(新生儿感冒症状) 霰粒肿是怎么引起的?(霰粒肿是因为什么引起的) 大人35.7度是低烧吗正常吗(大人35.7度是低烧吗) 氟斑牙做美白效果怎么样(氟斑牙能美白到什么程度) 放血疗法有什么好处和作用(放血疗法有什么好处) 乳腺癌化疗一次多少钱医保能报销多少(乳腺癌化疗一次多少钱)
您的位置:首页 >企业新闻 >

快速上手mRNA-LNP等脂质纳米颗粒包裹核酸,超全超详细的入门级实验指南!

导读 基于微流控混合芯片制备核酸脂质纳米颗粒(mRNA-LNP合成为例)实验操作指南及LNP合成质量检测、转染细胞实验方案.目录实验方案:微流控混合...
基于微流控混合芯片制备核酸脂质纳米颗粒(mRNA-LNP合成为例)实验操作指南及LNP合成质量检测、转染细胞实验方案.

目录

实验方案:微流控混合方式制备包裹mRNA的脂质纳米颗粒

  1. 配制复方脂质-乙醇溶液:

  2. 配制柠檬酸缓冲液

  3. 计算RNA浓度,配制 mRNA-柠檬酸缓冲液:

  4. 微流控混合(智能LNP合成仪S1的操作说明):

  5. 粒径和PDI的检测

  6. 产物的处理和保存

实验方案:使用Qubit测定LNP包封率及利用率

实验方案:使用酶标仪测定LNP包封率

实验方案:mRNA-LNP转染293T细胞

 

实验方案:微流控混合方式制备包裹mRNA的脂质纳米颗粒(mRNA-LNP的制备)

实验目的:

参照 Moderna、BioNtech 和 Alnylam 的新冠疫苗配方,以SM102、ALC-0315、MC3为主要阳离子脂质制备包载 mRNA 的脂质纳米颗粒(lipid nanoparticles, LNPs)。

实验原理:

ALC-0315、 MC3、和 SM102 是三种可用于人体的脂质。在酸性条件下,质子化形成阳离子脂质,能够通过静电作用和带负电的 mRNA 结合。脂质与溶有mRNA的水性溶液混合后析出,自组装形成载有 mRNA 的脂质纳米颗粒。本实验中采用微流控混合法,让脂质溶液与mRNA溶液在微混合器中充分、迅速、高度可重复地形成粒径均一可控的LNP。在制备过程中,脂质溶解于乙醇,核酸溶解于酸性缓冲液中,故制备得到的LNP初产物含有高浓度乙醇。因此后续还需要透析或者超滤去除残余的乙醇并将溶液体系置换至中性缓冲液中,以备后续生物学实验及长期保存。

实验所需微流控设备及芯片:

设备:FluidicLab 智能LNP合成仪(型号:LNP-S1)(微流控LNP合成)

微混合芯片:FluidicLab LNP-B1

图片1.png 

实验步骤:

1. 配制复方脂质-乙醇溶液

2. 配制柠檬酸缓冲液

3. 计算RNA浓度,配制 mRNA-柠檬酸缓冲液

4. 微流控混合(智能LNP合成仪S1的操作说明)

5. 粒径和PDI的检测(良好的LNP合成结果如图)

图片2.png 

6. 产物的处理和保存

6.1.透析

6.2.超滤

 

实验步骤详细内容较长,可浏览器搜索FluidicLab前往官网查看完整实验方案。

 

 

 

附件:

LNP合成超滤与不同条件透析对比

图片3.png 

实验条件:仪器:Fluidiclab-S1 ;芯片:Fluidiclab-B1

MC3配方:12 mM浓度;流速比(脂相:水相)= 1 : 3;前废液 0.2 mL; LNP空包无mRNA;

合成初始——初产物经柠檬酸缓冲液稀释5倍后检测;

超滤使用Millipore 15mL/30 kd 超滤离心管(外径50mL尺寸)[UFC903096]。

透析使用Thermo Scientific™ Slide-A-Lyzer 透析盒 (20K MWCO)[66003]。

超滤后浓缩则使用[66003]透析盒后再使用[UFC903096]进行浓缩。

实验步骤参照第一节:《实验方案:微流控混合方式制备包裹mRNA的脂质纳米颗粒(mRNA-LNP的制备)》。

 

mRNA-LNP转染HEK-293T

图片4.png 

FluidicLab 提供LNP的DLS检测,包封检测,细胞转染等方案,欢迎咨询。

标签:

免责声明:本文由用户上传,如有侵权请联系删除!

最新文章