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革兰氏染色步骤分为(革兰氏染色步骤)

导读 关于革兰氏染色步骤分为,革兰氏染色步骤这个问题很多朋友还不知道,今天小六来为大家解答以上的问题,现在让我们一起来看看吧!1、操作步

关于革兰氏染色步骤分为,革兰氏染色步骤这个问题很多朋友还不知道,今天小六来为大家解答以上的问题,现在让我们一起来看看吧!

1、操作步骤:1 .涂片将培养的不同菌分别作涂片(注意涂片切不可过于浓厚),干燥、固定。

2、固定时通过火焰1一2 次即可,不可过热,以载玻片不烫手为宜。

3、2 .染色( 1 )初染加草酸铰结晶紫一滴,约一分钟,水洗。

4、( 2 )媒染滴加碘液冲去残水,并覆盖约一分钟,水洗。

5、( 3 )脱色将载玻片上面的水甩净,并衬以白背景,用95 %酒精滴洗至流出酒精刚刚不出现紫色时为止,约20 一30 秒钟,立即用水冲净酒精。

6、( 4 )复染用番红液染1 一2 分钟,水洗。

7、( 5 )镜检干燥后,置油镜观察.革兰氏阴性菌呈红色,革兰氏阳性菌呈紫色。

8、以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准,过于密集的细菌,常常呈假阳性。

9、( 6 ) 同法在一载玻片上以大肠杆菌与枯草芽孢杆菌混合制片,作革兰氏染色对比。

10、 革兰氏染色的关键在于严格掌握酒精脱色程度,如脱色过度,则阳性菌可被误染为阴性菌;而脱色不够时,阴性菌可被误染为阳性菌。

11、此外,菌龄也影响染色结果,如阳性菌培养时间过长,或已死亡及部分菌自行溶解了,都常呈阴性反应。

12、原理:革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。

13、它是1884 年由丹麦医师Gr 二创立的。

14、革兰氏染色法(Gram stain )不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类:染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌,用G+表示:染色反应呈红色(复染颜色)的称为革兰氏阴性细菌,用G 一表示。

15、细菌对于革兰氏染色的不同反应,是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

16、革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肤聚糖形成的网状结构组成的,在染色过程中,当用乙醇处理时,由于脱水而引起网状结构中的孔径变小,通透性降低,使结晶紫一碘复合物被保留在细胞内而不易脱色,因此,呈现蓝紫色;革兰氏阴性细菌的细胞壁中肤聚糖含量低,而脂类物质含量高,当用乙醇处理时,脂类物质溶解,细胞壁的通透性增加,使结晶紫一碘复合物易被乙醇抽出而脱色,然后又被染上了复染液(番红)的颜色,因此呈现红色。

17、革兰氏染色需用四种不同的溶液:碱性染料(basic dye )初染液;媒染剂(mordant ) ;脱色剂( decolorising agent )和复染液(counter stain )。

18、碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样,而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet )。

19、媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力,即以某种方式帮助染料固定在细胞上,使不易脱落,碘(iodine ) 是常用的媒染剂。

20、脱色剂是将被染色的细胞进行脱色,不同类型的细胞脱色反应不同,有的能被脱色,有的则不能,脱色剂常用95 %的酒精(ethanol )。

21、复染液也是一种碱性染料,其颜色不同于初染液,复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色,而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色,从而将细胞区分成G +和G 一两大类群,常用的复染液是番红。

本文分享完毕,希望对大家有所帮助。

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