关于高效液相色谱仪操作步骤,高效液相色谱仪这个问题很多朋友还不知道,今天小六来为大家解答以上的问题,现在让我们一起来看看吧!
1、转载:《分析测试百科网》高效液相色谱仪(Agilent 1100型)操作规程 不知道楼主要什么型号的液相色谱使用方法? 一、 开机 开机前准备:流动相使用前必须过0.45um的滤膜(有机相的流动相必须为色谱纯;水相必须用新鲜注射用水,不能使用超过3天的注射用水,以防止长菌或长藻类); 把流动相放入溶剂瓶中。
2、A瓶:为水相 B瓶:为有机相。
3、 2、打开电脑,选Win 2000,进入Win 2000界面。
4、 3、双击CAG Boodp server图标,放大CAG Boodp server小图标,出现窗口,5min内打开液相各部件电源开关,等待1100广播信息后,表示通讯成功连接,关闭CAG Boodp serve窗口。
5、 4、双击online图标,仪器自检,进入工作站。
6、 该页面主要由以下几部分组成: ——最上方为命令栏,依次为File,Run Control,Instrumen…等; ——命令栏下方为快捷操作图标,如多个样品连续进行分析、单个样品进样分析、调用文件保存文件……等; ——中部为工作站各部件的工作流程示意图;依次为进样器-输液泵-柱温箱-检测器-数据处理-报告; ——中下部为动态监测信号; ——右下部为色谱工作参数:进样体积、流速、分析停止时间、流动相比例、柱温、检测波长等。
7、 4、从“View”菜单中选择“Method and control”画面。
8、 二、 编辑参数及方法 开始编辑完整方法: 从“Method”菜单中选择“New method”,出现DEF-LC.M,从“Method”菜单中选择“Edit entire method”,选择方法信息、仪器参数及收集参数、数据分析参数和运行时间表等各项,单击OK,进入下一画面。
9、 2、方法信息: 在“Method Comments”中加入方法的信息,如方法的用途等。
10、单击OK,进入下一画面。
11、 3、泵参数设定: 进入“Setup pump”画面,在“Flow” 处输入流量,如1ml/min;在“Solvent B”处输入有机相的比例如70.0,(A=100-B),也可在Insert 一行“Timetable”,编辑梯度;输入保留时间;在“Pressure Limits Max”处输入柱子的最大耐高压,以保护柱子。
12、单击OK,进入下一画面。
13、 4、DAD检测器参数设定: 进入“DAD signals”画面,输入样品波长及其带宽、参比波长及其带宽(参比波长带宽默认值为100nm); 选择Stoptime:as Pupm; 在“Spectrum”中输入采集光谱方式“store”:选All;如只进行正常检测,则可选None; 范围Range:可选范围为190~950nm; 步长Step可选2.0nm; 阀值: 选择需要的灯; Peak width(Response time)即响应值应尽可能接近要测的窄峰峰宽,可选“2s”或4s; Slit-:狭窄缝,光谱分辨率高;宽时,噪音低。
14、可选4nm 单击OK,进入下一画面。
15、 5、进入“Signal Details”画面,单击OK,进入下一画面。
16、 6、进入“Edit Integration Events”(编辑积分结果)画面,单击OK,进入下一画面。
17、 7、进入“Specify report”(积分参数)画面,单击OK,进入下一画面。
18、 8、进入“Instrument curves”画面,单击OK,进入下一画面。
19、 9、进入“Run Time checklist”(运行时间表)画面,选择“Date Acquistition”和“Standard Date Analsis”,单击OK,完成参数设定,回到工作站画面。
20、 10、单击“Method”菜单,选中“Save method as”,输入文件名,单击OK。
21、(路径:eHPCHEM1methods***) 注:如果调用一个方法,则在“Method”菜单,选中“Load method”,选方法名,单击OK。
22、 1从菜单“View”中选择“Online signal”,选中Window 1 ,然后单击Change钮,将所要绘图的信号移到右边的框中,点OK。
23、(如同时检测二个信号,则重复11,选中Window 2)。
24、 三、运行样品 单击泵(Pump)图标下面的小瓶图标,输入溶剂的实际体积和瓶体积,并且选停泵体积。
25、单击OK。
26、 2、手动打开Purge阀:逆时针转2~3圈。
27、 3、单击泵(Pump)图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。
28、设Flow:5ml/min,单击OK。
29、 4、开泵:直接点Pump图标下面的泵开关小图标,或单击Pump图标,出现参数设定菜单,单击Pump contrlo选项,选中On,单击OK。
30、 5、系统开始排液(Purge),直到管线内(由溶剂瓶到泵入口)无气泡为止,切换通道继续排液,直到所有通道无气泡为止。
31、(每个管线内液体约20ml,在5ml/min的流速下,均需4~5min才能排完) 6、单击泵(Pump)图标,出现参数设定菜单,单击Setup pump选项,进入泵编辑画面。
32、把Flow改为0.5~1.0ml/min,单击OK。
33、 7、等待流速降下来后,关闭排液阀。
34、 8、待压力稳定后,从“Instrument”菜单中选择“System on”或单击GUI图标的On图标启动系统。
35、开始走基线,并可选择观察信号。
36、 注:仪器运行过程,画面颜色由灰色转变成黄色或绿色,当各部件都达到所设参数时,画面均变为绿色,左上角红色的“not ready”变为绿色“ready”,表明可以进行分析。
37、(此时如果要终止仪器的运行,可单击流程图右下角的“off”,再单击“Yes”,关闭输液泵和检测器氘灯)。
38、 9、单击最大化按钮,将online Plot窗口放大。
39、待基线平稳后,点信号窗口的“Banlance”,调至零点。
40、 10、等仪器Ready ,从“Runcontrol”菜单中选择F5或“Run method”。
41、 1编辑样品信息: 从“Run control”菜单中选择“Sample into”选项,选择“Sample Info…..”,即打开了样品信息页面,输入操作者(Operator Name)、数据存贮通道(Subdirectory)、样品名(Sample Name)、进样瓶号(Vial)、浓缩因子(Multipline)、稀释因子(Dilution)、,“Data file”中选择 “Prefix”,在Prefix框中输入批号或日期等,在Counter框中输入计算器的起始位,仪器会自动命名。
42、(样品量(Sample Amount)、内标量(ISID Amount)可不选,Location只对自动进样器有用,不填则走空白,检查干扰峰的来源。
43、) 单击OK。
44、 12、进样分析: 进样阀扳到Load位置,插入注射器,注样品,进样后扳动阀至Inject位置。
45、 13、进样分析结束,点Close键退出样品分析。
46、 (注意:检测完尽量要关DAD的灯,以保持灯的寿命。
47、单击DAD图标,出现参数设定菜单,单击control ,选择关灯。
48、) 四、数据分析方法编辑(可在offline下操作) 从“View” 菜单中选“Date analysis”进入数据分析画面。
49、该页面最上方为命令栏,依次为File ,Graphics,Integration……等。
50、命令栏下为快捷操作图标,如积分、校正、色谱图、单一色谱图调用、多色谱图调用、调用方法、保存等。
51、 2、 从“File”菜单中选“Load signal”,或单击快捷操作的“单一色谱图调用”图标,选择色谱图文件名,单击“OK”,画面中即出现所调用的色谱图。
52、 3、 做图谱优化,从“Graphics”菜单中选择“Signal options”选项。
53、从Ranges中选择Auao scale及合适的显示时间,单击OK,或选择“Use Ranges”调整。
54、反复进行,直到图的比例合适为止。
55、 4、 积分 (1)先调用所要分析的色谱图,从“Integration”中选择“Auto integrate”,从“Integration”中选择“Integration Results”,此时仪器将内置的积分参数给出积分结果。
56、如积分结果不理想,再从“Integration”菜单中选择“Integration Events”选项,或单击快捷操作的“编辑/设定积分表”图标,此时,在屏幕下方左侧出现积分参数表,右侧为积分结果,在积分参数表中按实际的要求输入修改的参数,如斜率(Slope sensitivity)、峰宽(Peak width)、最小峰面积(Area reject)、最低峰高(Height reject)等。
57、 (2)从“Integration”中选择“Integrate”选项或单击快捷操作的“对现有色谱图积分”图标,仪器即按照新设定的积分参数重新积分。
58、 (3)若积分结果不理想,则修改相应的积分参数,直到满意为止。
59、 (4)完成后,单击左边的“ˇ”图标,将积分参数存入方法。
60、 5、 打印报告: (1)从“Report”菜单中选择“Specify report”选项,或单击最右侧快捷操作的“定义报告及打印格式”(右下角带叉的报告画面)图标,进入打印画面。
61、 (2)根据实际要求选择报告的格式和输出形式等。
62、可在“Calculate”右则的黑三角中选“Percent”(面积百分比),其它项不变。
63、(如 “Destination”项下选择“Screen”; “Based On”选“Area”;“Sorted By”选“Signal”;“Repirt Style”选“Short”;选择“Add chromatogram Output(打印色谱图)”;选择“With Calibrated Peaks”;选择“Portrait”;可根据需要选择“Size”)。
64、 (3)单击OK。
65、 (4)选择快捷操作的“报告预览”图标,可预览报告的全貌。
66、从“Report”菜单中,选择“Print Report”,则报告打印到屏幕上,如想输出到打字机上,则单击“Print”,即可进行报告的打印。
67、最后,单击“close”退出此操作页面。
68、 6、 定量分析 如果需要进行标准曲线制备,可按此项进行操作。
69、 (1)一级校正表的建立: 在“Data Analysis”界面下,调用最低浓度的色谱图,在“栏“Calibration”下,选择“New Calibration Table”,选择“Automatic Setup Level”,并设校正级数为 “1”,单击“OK”。
70、在画下方左侧出现校正表,右侧为校正图。
71、在画面左下侧的校正表中选择所要的色谱峰,输入校正级数、化学物名称及浓度,如果采用内标法,需对内标峰进行标记。
72、单击OK,工作站提示是否删除0浓度行,单击Yes 。
73、 (2)二级校正表的建立: 调用第二个色谱图,在命令栏“Calibration”下,选择“Add Level”,设为“2”,单击“OK”,在画面左下侧的校正表中输入校正级数、化学物名称及样品浓度。
74、(如需对校正表中的某些数据进行重新修正,可调用新的图谱,在命令栏“Calibration”下,选择“Recalibration”,并在校正表中输入校正级数,样品浓度。
75、)此时,校正表右侧自动绘制各组分的标准曲线,并进行线性回归。
76、单击校正表中的“Print”,可进行打印。
77、 五、关机 关机前,用过缓冲盐溶液必须先用100%的水冲洗系统(打开排液阀,调流速为5ml/min,冲洗约5 min,然后调流速为1ml/min,待流速降下来后,关闭排液阀,再冲洗冲洗约20 min);然后用甲醇同法清洗20min,然后关泵。
78、 注意:此方法适用于反相色谱柱,而正相色谱柱应用适当的溶剂冲洗。
79、 2、清洗进样器: 将进样器扳至Load的位置,用专用的注射器装约10ml适当溶剂冲洗进样器。
80、 当使用缓冲溶液时,要用水冲洗进样口,同时扳动进样阀数次,每次数毫升。
81、 3、退出化学工作站,及其它窗口,关闭计算机(用shut down)。
82、 4、关掉Agilent 1100电源开关。
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