关于southern blotting和western这个问题很多朋友还不知道,今天小六来为大家解答以上的问题,现在让我们一起来看看吧!
1、原理:Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。
2、其基本原理是:具有一定同源性的两条核酸单链在一定的条件下,可按碱基互补的原则特异性地杂交形成双链。
3、一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。
4、2、应用:(1)遗传病诊断;(2)DNA图谱分析;(3)检测样品中的DNA及其含量:先将DNA样品(含不同大小的DNA片段)先按片段长短进行分离,然后进行杂交。
5、这样可确定杂交靶分子的大小。
6、(4)PCR产物分析。
7、扩展资料Southern印迹杂交技术的过程:Southern印迹杂交技术包括两个主要过程:一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,即印迹(blotting);二是固定于膜上的核酸与同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程。
8、该技术是1975年英国爱丁堡大学的e.***.southern首创的,Southern印迹杂交故因此而得名。
9、早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后,经毛细管的虹吸作用,转移到硝酸纤维膜上。
10、印迹方法如电转法、真空转移法;滤膜发展了尼龙膜、化学活化膜(如APT、ABM纤维素膜)等。
11、利用Southern印迹法可进行克隆基因的酶切、图谱分析、基因组中某一基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性片断长度多态性分析(RFLP)等。
12、参考资料来源:百度百科-Southern印迹杂交技术。
本文分享完毕,希望对大家有所帮助。
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